Набір для аналізу життєздатності клітин Calcein AM

 

Назва продукту	кішка немає	спец.
Набір для аналізу життєздатності клітин Calcein AM (CCK-F)	G1609-100T	100T
	G1609-500T	500T

 

 

Calcein AM заснований на Calcein (Calcein Acetoxymethyl Ester) і вводить групу ацетилметоксиметилового ефіру (AM), яка не тільки маскує молекулярну частину Calcein, яка хелатує кальцій, але також посилює його гідрофобність, таким чином дозволяючи Calcein AM легко проникати в мембрану. живих клітин і розщеплюватися ендогенними клітинними естеразами до кальцеїну. Кальцеїн, який втратив свою групу АМ, не може легко пройти через клітинну мембрану і, таким чином, утримується всередині клітини; крім того, молекулярна частина хелатного кальцію частково оголюється, що дозволяє зонду кальцеїну зв’язуватися з іонами кальцію в живій клітині та випромінювати сильну зелену флуоресценцію. Однак мертві клітини не мають естерази і не можуть бути гідролізовані до Кальцеїну AM, тому він не може позначити мертві клітини. Calcein AM має низьку цитотоксичність і мало впливає на клітинні функції, такі як проліферація клітин або хемотаксис лімфоцитів, що робить його чудовим флуоресцентним зондом для фарбування живих клітин.

 

Цей продукт, Calcein AM Cell Activity Assay Kit, також відомий як Cell Fluorescence Counting Kit (CCK-F), є набором для аналізу для оцінки активності, токсичності та проліферації клітин шляхом мічення живих клітин флуоресцентним зондом Calcein AM. Цей набір був оптимізований і налаштований, не тільки має високу чутливість виявлення та широкий лінійний діапазон, але також вимагає лише короткого часу інкубації для завершення виявлення клітин. Він простий в експлуатації і не потребує маркування радіоізотопами або таких етапів, як кристалізація та розчинення, що може зменшити помилки, викликані експериментальними операціями, і підвищити точність і відтворюваність.

 

 

Судно з мокрим льодом; зберігати при -20 градусів у темряві.; Намагайтеся уникати повторного заморожування і розморожування, дійсний протягом 12 місяців.

 

 

Номер компонента	компонент	G1609-100T	G1609-500T
G1609-1	Кальцеїн AM Розчин	100 μL	500 μL
G1609-2	Буфер для аналізу CCK-F	10 мл	50 мл
Інструкція		Один примірник

 

 

1. Приготування робочого розчину кальцеїну АМ

Для 96-лункового планшета для культури клітин використовуйте 100 мкл робочого розчину кальцеїну AM на лунку. Приготуйте відповідну кількість робочого розчину кальцеїну AM, як зазначено в наступній таблиці, і ретельно перемішайте.

 

компонент	10 аналізів	50 аналізів	100 аналізів
Кальцеїн AM Розчин	10 μL	50 μL	100 μL
Буфер для аналізу CCK-F	1 мл	5 мл	10 мл

 

2. Виявлення адгезивних клітин:

Наступні кроки відповідають 96-схемі виявлення лункових планшетів, а інші системи багатолункових планшетів потрібно налаштувати відповідно до ситуації.

a. Посів клітин: клітини рівномірно висівають у 96-планшет з лунками з певною щільністю та обробляють препаратами або іншими методами попередньої обробки (щільність посіву визначається такими факторами, як розмір клітин, швидкість росту тощо);

b. (Додатково) Промивання клітин: видаліть культуральне середовище та промийте клітини один-два рази PBS (рекомендовано G4202), щоб видалити сироватку, феноловий червоний та/або препарати, які заважають аналізу.

в. Маркування зонда: після видалення середовища для культури клітин або буфера PBS додайте 100 мкл робочого розчину кальцеїну AM та інкубуйте при 37 градусах протягом 30 хвилин у темряві.

d. (Необов’язково) Інкубація клітин: продовжуйте інкубувати 15-30 хв з новим середовищем для культури клітин, щоб переконатися, що внутрішньоклітинний кальцеїн AM повністю гідролізований.

д. Виявлення флуоресценції: після інкубації виміряйте флуоресценцію за допомогою флуоресцентного пристрою для зчитування мікропланшетів (максимальна довжина хвилі збудження зонда Calcein AM становить 501 нм, а максимальна довжина хвилі випромінювання – 521 нм) і обчисліть життєздатність клітин. Інтенсивність флуоресценції пропорційна кількості життєздатних клітин. Для спостереження за результатами фарбування також можна використовувати флуоресцентну мікроскопію.

3. Аналіз суспензійних клітин:

a. Клітинний посів: клітини рівномірно висівають у 24-лунковий планшет із певною щільністю та обробляють препаратами або іншими методами попередньої обробки (щільність посіву визначається такими факторами, як розмір клітин, швидкість росту тощо);

b. (Необов’язково) Промивання клітин: центрифугуйте клітинну культуру при 1,000×g протягом 3-5 хвилин, видаліть супернатант і двічі промийте клітини PBS, щоб видалити сироватку, феноловий червоний та/або препарати, які перешкоджають аналіз.

в. Позначення зонда: після центрифугування при 1000 g протягом 3-5 хв, видаліть середовище для культури клітин або буфер PBS, додайте відповідну кількість робочого розчину Calcein AM та інкубуйте при 37 градусах протягом 30 хвилин у темряві;

d. (Необов’язково) Інкубація клітин: продовжуйте інкубувати 15-30 хв з новим середовищем для культури клітин, щоб переконатися, що внутрішньоклітинний кальцеїн AM повністю гідролізований.

д. Виявлення флуоресценції: після інкубації виміряйте флуоресценцію за допомогою флуоресцентного пристрою для зчитування мікропланшетів або проточної цитометрії (максимальна довжина хвилі збудження зонда Calcein AM становить 501 нм, а максимальна довжина хвилі випромінювання – 521 нм). Життєздатність клітин пропорційна інтенсивності флуоресценції. Залежно від мети експерименту, ядра також можуть бути додатково забарвлені або виявлені за допомогою інших інструментів, таких як флуоресцентна мікроскопія.

 

 

1. Коротко відцентрифугуйте розчин Calcein AM перед використанням, щоб зменшити втрату реагенту.

2. Кальцеїн AM легко розкладається у вологому середовищі. Аліквоту після отримання щільно закрийте та зберігайте при -20 градусах.

3. Кальцеїн АМ нестійкий у водних розчинах. Робочий розчин Кальцеїн АМ готовий до використання та придатний до застосування протягом 24 годин.

4. Оптимальний час інкубації різний для різних типів клітин, який можна регулювати та оптимізувати на основі результатів фарбування.

5. Використовуйте чорний багатолунковий планшет для вирощування клітин, якщо для вимірювання використовується флуоресцентний пристрій для зчитування мікропланшетів.

6. Флуоресцентні барвники підлягають гартуванню, обробляють і зберігають подалі від світла.

7. Для вашої безпеки та здоров'я, будь ласка, одягайте захисні окуляри, рукавички або захисний одяг.

 

Тільки для дослідницького використання!

 

 

Популярні Мітки: набір для аналізу життєздатності клітин кальцеїну am, Китай, набір для аналізу життєздатності клітин кальцеїну am, виробники, постачальники, фабрика