Набір для прямої ПЛР тваринних тканин

 

Назва продукту	кішка немає	спец.
Набір для прямої ПЛР тваринних тканин	G3310-100T	100 T
	G3310-500T	500 T

 

 

Продукт спеціально розроблений для ампліфікації безпосередньо з тканин тварин. Застосовні зразки включають свіжі або заморожені нутрощі ссавців, нігті, волосся, рибок даніо, дрозофіл, культивовані клітини тощо. Унікальний буфер для лізису тваринних тканин A поєднується з буфером для лізису тваринних тканин B для швидкого вивільнення геномної ДНК у мікротканинах без необхідності геному. вилучення та очищення, який простий в експлуатації, зменшує втрати зразків і значно скорочує трудомісткі експерименти. Продукт лізису може зберігатися при -20 градусів протягом тривалого часу.

2×Animal Tissue Direct PCR Mix with Dye містить усі компоненти, необхідні для ПЛР, крім матриць і праймерів. ДНК-полімераза здатна швидко ампліфікуватися та протистояти інгібіторам після модифікації. PCR Mix також містить різноманітні підсилювачі реакції, які можуть додатково підвищити ефективність і точність ампліфікації, а також ампліфікувати цільові гени до 3 кб.

 

 

Судно з мокрим льодом; Буфер для лізису тваринних тканин A, зберігається при 4 градусах; Інші компоненти повинні зберігатися при -20 градусі; Термін дії 12 місяців.

 

 

Номер компонента	компонент	G3310-100	G3310-500
G3310-1	Буфер для лізису тваринних тканин A	5 мл	25 мл
G3310-2	Буфер для лізису тваринних тканин B	200 µL	1 мл
G3310-3	2 × Суміш для прямої ПЛР тваринної тканини (+ барвник)	1 мл	5×1 мл
Інструкція		Один примірник

 

 

1. Лізис зразків для вивільнення геномної ДНК

а). Рекомендоване дозування зразка

Тип зразка	Сума
Вісцеральна тканина тварин	Менше або дорівнює 10 мг
волосся	Менше або дорівнює 10 мг
ніготь	Менше або дорівнює 10 мг
Клітини тварин	Менше або дорівнює 103 клітинкам

 

б). Приготуйте розчин для лізису

компонент	Лізисний розчин (один зразок)
Буфер для лізису тваринних тканин Aa	50 µL
Буфер для лізису тваринних тканин B	2 µL

a. Буфер для лізису тваринної тканини A з’являється білим осадом при низькій температурі. Інкубуйте при 37 градусах протягом 2-3 хв, поки білий осад не зникне перед використанням.

в). Обережно перемішайте та миттєво центрифугуйте

г). Зразки зважували відповідно до рекомендованого об’єму зразка та поміщали в 1,5 мл пробірки EP, до яких додавали лізат, необхідний для окремих зразків, гарантуючи, що тканина була занурена в лізат, і пробірки центрифугували та інкубували при 50 градусах протягом 10 хв, з подальшою інкубацією при 95° протягом 3 хв.

(1) д). Центрифугуйте лізовані залишки при 12000 об/хв протягом 1 хв до дна пробірки, і супернатант можна використовувати безпосередньо як матрицю для реакції ПЛР. Супернатант можна перенести в іншу стерильну пробірку ЕР і помістити при -20° для тривалого зберігання.

(2) Рекомендована реакційна система ПЛР (20 мкл):

компонент	20 мкл rxn	Остаточна концентрація
Шаблони	1-2 μL	як вимагається
Прямий праймер (10 мкМ)b	1 μL	0.5 μM
Зворотний праймер (10 мкМ)b	1 μL	0.5 μM
2 × Суміш для прямої ПЛР тваринної тканини (+ барвник)	10 μL	1×
ддH2O	Додайте до 20 мкл

a: Дозування шаблону не повинно перевищувати 1/10 реакційної системи.

b: Кінцева концентрація праймера становила {{0}}.5-1.0 мкМ. Рекомендована концентрація праймера становить 0,5 мкМ. Занадто мало праймерів може призвести до низького виходу ампліфікації або її відсутності, а занадто багато праймерів може призвести до неспецифічної ампліфікації.

(3) Рекомендовані умови ПЛР-ампліфікації:

Крок	Температура	час	Цикли
Початкова денатурація	98 градусів	2 хв	1
Денатурація	98 градусів	15 s	35
Відпал	50-65 ступінь	20 s
Розширення	72 градуси	10 с/кб
Остаточне розширення	72 градуси	5-10 хв	1
Тримайте	4-16 ступінь	Назавжди

 

 

1. Перед використанням реагенту обережно перемішайте його вгору та вниз.

2. Уникайте циклів заморожування-розморожування, інакше геном буде деградований і це вплине на ефект ампліфікації ПЛР.

3. Буфер для лізису тваринних тканин A і буфер для лізису B тваринних тканин слід використовувати після їх підготовки та залишати на місці протягом тривалого періоду часу, що може вплинути на лізис.

4. Для зразків, які важко піддаються лізису, таких як нігті, волосся, черепашка тощо, час лізису можна збільшити до 20 хвилин при 50 градусах.

5. Перед лізисом кишкової тканини використовуйте ddH2O для очищення поверхневих забруднень, і ефект посилення є кращим.

6. Після лізису в пробірці EP залишається тканина з неповним лізисом, що є нормальним явищем і не впливає на використання.

 

Тільки для дослідницького використання!

 

 

Популярні Мітки: набір для прямої ПЛР тваринної тканини, виробники, постачальники, фабрика набору для прямої ПЛР тваринної тканини