MitoTracker Red CMXRos

 

Назва продукту	кішка немає	спец.
Mito Tracker Red CMXRos	G1723-50UG	50 мкг

 

 

MitoTracker Red CMXRos (мітохондріальний червоний флуоресцентний зонд) є похідним Х-розаміну з молекулярною масою 531,52, довжиною хвилі збудження 578 ± 3 нм і довжиною хвилі випромінювання 599 ± 4 нм. Барвник може безпосередньо проникати в живі клітини, розташовуватися в мітохондріях і здатний ковалентно зв’язуватися з мітохондріями. Принцип специфічного мічення мітохондрій полягає в тому, що скелет зонда з позитивним зарядом може розташовуватися на негативно заряджених мітохондріях, а хлорметильна група на зонді може ковалентно зв'язуватися з вільною сульфгідрильною групою в мітохондріях, що відіграє роль флуоресцентного мічення. ; мітохондрії клітини можна просто позначити, інкубуючи їх із живими клітинами протягом певного періоду часу, а після мічення мітохондрій мітохондрії можна додатково обробити шляхом фіксації та перфорації, що можна використовувати для наступних експериментів із мультиміченням. .

 

 

Судно з мокрим льодом; Зберігати при -20 градусів захищеному від світла терміном дії 12 місяців.

 

 

компонент	G1723-50UG
Mito Tracker Red CMXRos	50 мкг
Інструкція	1 шт

 

 

1. Приготування дослідного робочого розчину:

1.1. Цей продукт має форму сухого порошку, який перед використанням слід короткочасно відцентрифугувати на високій швидкості, щоб переконатися, що він осів на дно пробірки. Надайте свій власний ДМСО класу клітин.

1.2. Приготування розчину для зберігання: додайте 94 мкл ДМСО (клітинний рівень) у пробірку, продуйте та добре перемішайте, щоб повністю розчинити барвник, тобто розчин для зберігання мітохондріального флуоресцентного барвника з концентрацією 1 мМ (інформація про молекулярну масу на на етикетці продукту), а потім ненадовго відцентрифугуйте на високій швидкості, щоб уникнути втрати реагентів, що висять на стіні. Зберігайте розчин для зберігання при -20 градусів. Рекомендується зберігати його в менших розмірах і уникати повторного заморожування та розморожування.

1.3. Приготування робочого розчину для аналізу: якщо аналіз виконується безпосередньо після фарбування, розведіть розчин для зберігання в робочому розчині для мітохондріального аналізу в кінцевій концентрації 0.1-0,25 мкМ біологічним буфером (Hanks, PBS). ) або безсироваткове базальне середовище; Якщо після фарбування потрібні наступні операції, такі як фіксація та перфорація, розведіть розчин для зберігання в робочому розчині для мітохондріального аналізу в кінцевій концентрації 0.4-0.6 мкМ біологічним буфером (Хенкс, PBS) або базальне середовище без сироватки;

2. Фарбування клітин (наведений нижче протокол для приклеєних клітин; центрифугування необхідне для обміну суспензійних клітин)

2.1. Клітини висаджують на пластини з культурою клітин або пластини для лазіння клітин, поки вони не зближаться до певної міри;

2.2. Середовище клітинної культури видаляють і промивають 1-2 разів попередньо нагрітим буфером протягом 3-5 хв кожного разу;

2.3. Додайте попередньо нагрітий робочий розчин для виявлення мітохондрій та інкубуйте при 37 градусах протягом 30 хвилин в інкубаторі для культур клітин (через різні типи та стани клітин час інкубації можна певною мірою регулювати);

2.4. Видаліть інкубаційний розчин і промийте буферним розчином 2-3 разів протягом 3-5 хв кожного разу;

2.5. Безпосередньо або за допомогою монтажного середовища проти вицвітання (рекомендовано G1401) плівки запечатують і спостерігають під флуоресцентним мікроскопом (Ex=579 нм, Em=599 нм);

3. Фіксація клітин і перфорація та інші маніпуляції (опціонально):

Примітка: після фарбування цей продукт можна зафіксувати та перфорувати, але флуоресцентний сигнал буде послаблений після фіксації.

3.1. Клітинна фіксація

3.1.1. Клітини, оброблені мітохондріальним флуоресцентним барвником, фарбування та промивання, додають до фіксатора (рекомендовано G1101) і фіксують протягом 10 хвилин при кімнатній температурі;

3.1.2. Зніміть фіксатор і промийте буфером 2-3 разів протягом 3-5 хв кожного разу;

3.2. Перфорація комірки

3.2.1. До фіксованих і промитих клітин додають 0.2-0.5% Triton X-100 і перфорують протягом 10 хвилин при кімнатній температурі;

3.2.2. Перфораційну рідину видаляють і промивають буферним розчином 2-3 разів протягом 3-5 хв кожного разу;

3.3. Клітини фарбують, а потім фіксують і перфорують для обробки, і їх можна використовувати для наступних експериментів, таких як мультимічення.

 

 

1. Через різні типи та стани клітин робочу концентрацію барвника та час інкубації можна регулювати відповідним чином.

2. Барвник потрібно використовувати для мітохондріальної локалізації в стані живих клітин, і клітини не можна спочатку фіксувати, інакше це призведе до хибнопозитивних результатів неточної локалізації. Після фарбування живих клітин можна проводити фіксацію та подальші операції.

3. Під час фарбування та промивання живих клітин робочий розчин для аналізу та промивний буфер необхідно попередньо нагріти до 37 градусів. Фарбування та промивання здійснюють шляхом інкубації в термостаті, щоб не впливати на морфологію клітин стимуляцією різницею температур.

4. Щоб запобігти згасанню флуоресценції, весь процес фарбування потрібно проводити подалі від світла.

5. Основні суміші зондів слід зберігати в окремих контейнерах, щоб уникнути повторного заморожування та розморожування. Щоб уникнути марнотратства, розчин для фарбування готується за потреби, готовий до використання.

6. Для вашого здоров'я та безпеки під час роботи надягайте лабораторний халат і рукавички.

 

Тільки для дослідницького використання!

 

 

Популярні Мітки: mitotracker red cmxros, Китай mitotracker red cmxros виробники, постачальники, фабрика