® IF555-аглютинін зародків пшениці (WGA, червоне світло)

 

Назва продукту	кішка немає.	спец.
iF555-аглютинін зародків пшениці (WGA, червоне світло)	G1731	100УЛ

 

 

Аглютинін зародків пшениці (WGA) — це лектин, який зв’язується з N-ацетил-D-глюкозаміном і сіаловою кислотою, і є одним із найбільш вивчених і широко використовуваних класів лектинів. Наразі це найбільш вивчений і широко використовуваний клас лектинів. WGA зв’язується з глікокон’югатами, а його похідні та кон’югати широко використовуються для мічення клітинних мембран і фіброзних рубцевих тканин для флуоресцентного зображення та аналізу. Специфічність зв’язування вуглеводів WGA спрямована на послідовність -1,4-GlcNAc-пов’язаних залишків, відома як декстрини хітину. Кожен моносахарид містить два ідентичних невзаємодіючих сайти зв’язування, які комплементарні трьом або чотирьом -1,4-одиницям GlcNAc. З протестованих моносахаридів лише GlcNAc зв’язується з WGA, ManNAc – ні, а GalNAc зв’язується лише слабко. WGA з високою спорідненістю зв’язується з внутрішніми залишками GlcNAc у великих олігосахаридах, що містять Gal (1-4)GlcNAc (1-3) (тобто глікани полі(амінолактозного) типу) N-ацетилнейрамінова кислота бере участь у низькоафінній взаємодії тільки WGA. WGA демонструє складну структуру специфічності гліканів, яку можна використовувати для структурного аналізу складних вуглеводів. Афікс iFluor®555 WGA, мабуть, найяскравіший афікс WGA. Він демонструє яскраву та червону флуоресценцію барвника iFluor®555. Афікс iFluor®555 WGA зв’язується із залишками сіалової кислоти та N-ацетилглюкозамінілу, як і зв’язувач AF555 WGA.

 

Аглютинін зародків пшениці (WGA) — це лектин 36 кДа, який зазвичай використовується для мічення клітин ссавців, клітинних мембран грампозитивних бактерій і дріжджів, а також скелетних і серцево-крижових мембран, серед іншого, завдяки його властивості зв’язуватися з N-ацетилом. - -D-глюкозамінільні залишки та N-ацетил- -D-глюкозамінільні олігомери в клітинних мембранах. Коли WGA використовується для фарбування кардіоміоцитів, клітинні мембрани кардіоміоцитів можна пофарбувати так, що можна побачити, чи є вони гіпертрофічними чи ні, порівнюючи зображення з нормальною групою, а також діаметр і площу пофарбованих клітин. вимірювати за допомогою спеціального програмного забезпечення, що дозволяє аналізувати, чи є кардіоміоцити гіпертрофованими чи ні.

 

 

Судно з мокрим льодом; Зберігати при температурі -20 градусів протягом 12 місяців.

 

 

компонент	G1722-50UL
iF555-аглютинін зародків пшениці (WGA, червоне світло)	100 μL
Інструкція	1 шт

 

 

1. Приготуйте самостійно1×PBS буфер(рН 7.2-7.4, рекомендованоG4202), фіксатор, що містить 3.0-4.0% формальдегіду (рекомендованоG1101, що містить 4% PFA),герметик, що гасить флуоресценцію(рекомендовано G1401), іготовий до використання розчин для фарбування DAPI(рекомендованоG1012).

2. Під час першого використання продукту відцентрифугуйте повністю розплавлений продукт на низькій швидкості протягом 1 хвилини, щоб запобігти втраті стінки пробірки. Рекомендується дозувати продукт відповідно до кількості, використаної в одному експерименті, щоб запобігти втраті розчинника через випаровування. Зберігати при -20 градусах далеко від світла.

3. Перед формальними експериментами аспіруйте 5 мкл iF555-аглютиніну зародків пшениці (WGA, червоне світло) і змішайте з 1 мл PBS, щоб отриматиякщо555-WGA робоче рішення. Ефект фарбування може бути різним для різних типів клітин, будь ласка, зверніться до літератури, щоб дізнатися про оптимальну робочу концентрацію фарбування, або проведіть попередній тест, щоб дізнатися.iF555-WGA робоче рішенняготовий до використання, зберігається при кімнатній температурі та в захищеному від світла місці та використовується в той же день.

 

 

Фарбування живих клітин (12-лунковий планшет як приклад)

1. Промийте клітини буфером 1×PBS 2 рази.

2. Додайте 100 мкл робочого розчину iF555-WGA до кожної лунки клітин та інкубуйте протягом 10-30 хв при 37 градусах, захищеному від світла. Подбайте про герметизацію, щоб запобігти випаровуванню рідини. Видаліть інкубаційний розчин і промийте буферним розчином 2-3 разів протягом 3-5 хв кожного разу.

3. Після завершення інкубації клітини тричі промивали буферним буфером 1 × PBS протягом 5 хвилин кожен раз.

4. Результати спостерігали за допомогою флуоресцентної мікроскопії або лазерної конфокальної мікроскопії.

 

Виправлено фарбування клітин (6-сканер для клітин лункового планшета як приклад)

1. Культивовані клітини сканували (при щільності принаймні 50% конфлюентності), культуральне середовище видаляли і клітини двічі промивали буфером 1× PBS, попередньо нагрітим до 37 градусів.

2. Додайте відповідну кількість фіксатора, щоб покрити клітини, і зафіксуйте на 10-30 хв при кімнатній температурі.

3. Фіксатор відсмоктували, а клітини промивали 1× PBS буфером при кімнатній температурі 2-3 разів по 10 хв.

4. Трохи струснувши клітинний сканер насухо, намалюйте коло гістохімічним пером так, щоб клітини розташувалися в центрі кола. Візьміть 100 мкл робочого розчину iF555-WGA, щоб повністю покрити клітини, та інкубуйте при температурі 37 градусів протягом 30 хвилин подалі від світла. Будьте обережні, щоб герметизувати та запобігати випаровуванню рідини для висихання предметних стекол.

5. Після завершення інкубації клітини тричі промивали буфером 1 × PBS протягом 5 хвилин кожен раз.

6. (Необов’язково) Краплі готового до використання фарбувального розчину DAPI додавали до предметних стекол сканера, щоб покрити клітини, і ядерне фарбування проводили протягом 8 хв. Клітини промивали 1× PBS буфером 2-3 разів для 30 с-1 хв кожного разу.

7. Кроли клітин злегка струшували насухо та перевертали на предметне скло з краплею антифлуоресцентного герметика, а надлишки герметика видаляли паперовим рушником.

[Примітка]Етапи 6 і 7 можна замінити герметиком проти флуоресценції, що містить DAPI (рекомендація G1407), який забезпечує фарбування ядер і герметизацію плівки одночасно.

8. Результати спостерігали за допомогою флуоресцентної мікроскопії або лазерної конфокальної мікроскопії з вибраними каналами 555 (Ex/Em=556/574 нм) і DAPI (Ex/Em=364/454 нм).

 

Фарбування зрізів тканин

1. Попередня обробка зрізу тканини:

Заморожені зрізи (заморожені зрізи свіжої тканини або заморожені зрізи фіксованої тканини) залишали стояти при кімнатній температурі протягом кількох хвилин і повертали до кімнатної температури; зрізи занурювали у фіксатор на 10-15 хв при кімнатній температурі, видаляли та сушили природним шляхом, а потім зволожували та промивали очищеною водою або буфером 1 × PBS, щоб видалити залишки фіксатора на тканині.

Парафінові зрізи депарафінізували та повторно гідратували;

Зрізи тканин (парафінові зрізи або заморожені зрізи фіксованих тканин) поміщали в касету для відновлення, наповнену буфером для відновлення антигену EDTA (pH 8.0) у мікрохвильову піч для відновлення антигену. Середній вогонь протягом 8 хвилин припиніть вогонь на 8 хвилин до середньо-низького вогню протягом 7 хвилин, цей процес має запобігти надмірному випаровуванню буфера, не сушіть предметні скла. Після природного охолодження предметні скла поміщали в буфер 1 × PBS і промивали струшуванням на знебарвлюючому шейкері 3 рази, кожен раз протягом 5 хв.

2. Фарбування: намалюйте коло навколо тканини гістохімічною ручкою після того, як зріз тканини трохи висохне. Додайте 50-100 мкл робочого розчину iF555-WGA у коло, щоб покрити тканину, та інкубуйте при 37 градусах від світла протягом 30 хвилин. Подбайте про герметизацію, щоб уникнути випаровування рідини та висихання предметних стекол.

3. Промивання: після завершення інкубації зразки тричі промивали буфером 1 × PBS протягом 5 хвилин кожен раз.

4. Фарбування ядра (необов’язково): по краплях додайте готовий до використання розчин для фарбування DAPI до зразка, щоб покрити клітини, і виконайте фарбування ядра протягом 8 хв. Промийте зразок буфером 1 × PBS 2-3 разів протягом 30 с-1 хв кожного разу.

5. Герметизація: після того, як зрізи злегка потрясуть насухо, додайте краплю антифлуоресцентного герметика до зразка та закрийте його відповідним покривним скельцем.

[Примітка]Етапи 4 і 5 можна замінити герметиком проти флуоресценції, що містить DAPI (рекомендація G1407), який забезпечує фарбування ядра та запечатування плівки одночасно.

6. Мікроскопія: флуоресцентна мікроскопія або лазерна конфокальна мікроскопія для спостереження за результатами з вибором каналів 488 (Ex/Em=556/574 нм) і DAPI (Ex/Em=364/454 нм).

 

 

1. Зразки, які фіксувалися протягом тривалого періоду часу (наприклад, парафінові зрізи), повинні бути піддані процесу піролізу, інакше позитивні результати будуть слабкими або майже відсутніми.

2. Фарбування WGA для аналізу міокарда вимагає високого рівня тканини міокарда, яка має бути повною та однорідною, і найкраще надавати зразки парафінових зрізів.

3. Для клітинних зразків уникайте використання пермеабілізуючих розчинів перед фарбуванням, оскільки це може призвести до фарбування структурних компонентів цитоплазми.

4. Флуоресцентні барвники підлягають гарту, тому рекомендується якнайшвидше після фарбування завершити тестування та фотознімки.

5. Будь ласка, одягайте лабораторний халат і рукавички під час роботи.

 

Тільки для дослідницького використання!

 

 

Популярні Мітки: ® if555-аглютинін зародків пшениці (wga,червоне світло), Китай ® if555-аглютинін зародків пшениці (wga,червоне світло) виробники, постачальники, фабрика