Середовище для розділення лімфоцитів (людина)

Цей продукт є розчином для розділення за градієнтом щільності, придатним для розділення лімфоцитів периферичної крові людини та більшості мононуклеарних клітин ссавців. Його принцип в основному базується на різниці щільності між різними клітинами периферичної крові (щільність еритроцитів і гранулоцитів становить близько 1.090 г/мл; тромбоцитів — 1.030-1.035 г /мл; лімфоцитів і моноцитів 1.075-1.090 г/мл), лімфоцити виділені з периферичної крові градієнтом. центрифугування по щільності. Цей продукт є готовим до використання стерильним розчином для розділення з низьким рівнем ендотоксину з щільністю 1,077 ± 0,001 г/мл (20 градусів). Цей продукт оптимізований на основі традиційного діатризоату меглюміну Ficoll для підтримки стабільності розчину для розділення протягом більш тривалого часу після додавання зразка крові, що робить його простим у використанні та забезпечує високу чистоту та стан ізольованих лімфоцитів.

Судно з мокрим льодом; зберігати при 2-8 градусах, захищати від світла; термін дії 12 місяців.

Для виділення 1 мл лімфоцитів із периферичної крові людини об’ємне співвідношення крові та середовища для виділення лімфоцитів становить 1:1-1:2 з відповідними коригуваннями в межах цього діапазону; Вибираючи центрифужну пробірку, слід звернути увагу на те, щоб загальний об’єм крові та середовища для розділення лімфоцитів не перевищував двох третин об’єму пробірки.

1. Для отримання 2 мл розведеної цільної крові.

2. Внесіть 3 мл розчину для виділення лімфоцитів периферичної крові людини в стерильну центрифужну пробірку на 15 мл (рекомендовано EP-1500-J).

3. Нахиліть центрифужну пробірку на 45 градусів і повільно додайте 2 мл розведеної крові вздовж стінки пробірки в центрифужну пробірку так, щоб кров рівно лежала на верхньому шарі середовища для розділення лімфоцитів периферичної крові людини.

4. Рекомендовано використовувати центрифугу з горизонтальною головкою, помістити пробірку в адаптер з горизонтальною головкою, зменшити швидкість центрифуги (3-5 швидкості підходять) і центрифугувати при 800 x g протягом 25 хвилин при кімнатній температурі.

5. Після центрифугування пробірку обережно тримають на штативі для пробірок і спостерігають чітке розшарування: верхній шар – шар плазми; верхній середній шар — шар лімфоцитів; нижній середній шар - середній шар для відділення лімфоцитів; і найнижчий шар - шар еритроцитів і гранулоцитів (див. малюнок, що додається).

6. Видаліть верхній шар плазми та обережно аспіруйте шар білкової оболонки (шар лімфоцитів) у нову стерильну центрифужну пробірку.

7. Промийте 8 мл PBS (рекомендовано G4202) або іншого буфера, центрифугуйте при 100xg протягом 10 хвилин, потім видаліть супернатант.

8. Повторіть крок 7 (необов’язково).

9. Ресуспензія лімфоцитів у необхідному середовищі або буфері відповідно до мети досліду.

1. Продукт має бути повністю врівноважений і перемішаний догори дном при кімнатній температурі перед використанням. Належна температура для розділення становить 18-25 градусів.

2. Для підтримки активності лімфоцитів найкраще відбирати свіжу антикоагулянтну кров протягом 2 годин після забору крові; Якщо потрібне подальше посів і тест ізольованих лімфоцитів, будь ласка, зверніть увагу на асептику під час забору та відділення крові.

3. Розбавляючи або промиваючи буфер, не використовуйте буфер, що містить іони кальцію та магнію, щоб уникнути агрегації клітин крові.

4. Надмірне поглинання компонентів поза шаром білкової оболонки лімфоцитів призведе до змішування деяких гранулоцитів або тромбоцитів на стику.

5. Відмінності між зразками крові можуть вплинути на результати розділення. Відцентрову силу та час можна регулювати відповідно до фактичної ситуації. Еталонна відцентрова сила та діапазон часу становлять 500-1000 xg і 20-30 хв.

6. Це нормально, коли еритроцити осідають після змішування крові та середовища для розділення лімфоцитів протягом певного часу.

7. Для вашої безпеки та здоров'я, будь ласка, одягайте захисні окуляри, рукавички або захисний одяг.

Додаток: схематична діаграма кожного шару до і після відділення

Цей продукт призначений лише для наукових досліджень, а не для клінічної діагностики!

Популярні Мітки: середовище для розділення лімфоцитів (людина), виробники середовища для розділення лімфоцитів (людина) у Китаї, постачальники, фабрика